[摘要]　目的　建立呋喃西林沖洗劑的細菌內(nèi)毒素檢查方法。 方法　根據(jù)《中國藥典》2005年版二部附錄收載的細菌內(nèi)毒素檢查方法，采用鱟試劑法對呋喃西林沖洗劑進行干擾試驗。 結(jié)果　稀釋2倍的呋喃西林沖洗劑對細菌內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)無干擾，可用靈敏度為0.25 EU/mL的鱟試劑進行細菌內(nèi)毒素檢查。 結(jié)論　鱟試劑法可用于呋喃西林沖洗劑的細菌內(nèi)毒素檢查，對其進行質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞]　呋喃西林沖洗劑；細菌內(nèi)毒素；鱟試劑；干擾試驗

Bacterial endotoxin test in nitrofurazone rinse  YANG Ping, SUN Lu-lu, ZENG Wei-xin

[Key words]　Nitrofurazone rinse; Bacterial endotoxin; Tachypleus amebocyte lysate; Interference test

作者簡介：楊平(1980-)，女，藥師，碩士。從事專業(yè)：藥劑學(xué)。

Email：guoguokate3@yahoo.com.cn

呋喃西林作為外用消毒劑以前被批準(zhǔn)為外用的溶液劑，由于其臨床除了用于粘膜、腔道、皮膚炎癥外、還用于感染傷口、潰瘍面的沖洗濕敷^[1]，故2009年在北京市藥監(jiān)局下發(fā)的醫(yī)院制劑批準(zhǔn)文件中，將其納入沖洗劑管理。依據(jù)《中國藥典》2005年版(二部)的規(guī)定，沖洗劑應(yīng)增加細菌內(nèi)毒素或熱原的檢查^[2]，但是原來作為溶液劑管理的呋喃西林消毒劑沒有關(guān)于鱟試劑法檢測細菌內(nèi)毒素的方法學(xué)研究，本文參照藥典中細菌內(nèi)毒素檢查法的要求^[3]，對我院生產(chǎn)的呋喃西林沖洗劑進行了細菌內(nèi)毒素檢查方法的研究。

1  材料

1.1  儀器  CS101-E電熱鼓風(fēng)干燥箱(重慶四達實驗儀器有限公司)，儀表恒溫水浴鍋(黃驊市綜合電器廠)，MSI Minishaker漩渦混勻器(廣州IKA公司)；

1.2  試劑  呋喃西林原料藥(批號：070401，武漢久安藥業(yè)有限公司)；呋喃西林沖洗劑(批號20090223、20090313、20090323，北京世紀壇醫(yī)院)；鱟試劑(TAL，靈敏度：0.25 EU·mL^-1，批號：0810230，湛江博康海洋生物有限公司)；細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(規(guī)格：120EU/支，批號：150601-200862，中國藥品生物制品檢定所)；內(nèi)毒素檢查用水(BET水，規(guī)格：2 ml/支，批號：080905，湛江博康海洋生物有限公司)。

2  方法與結(jié)果

2.1  鱟試劑靈敏度復(fù)核實驗  按《中國藥典》2005年版二部附錄細菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定，對標(biāo)示靈敏度為0.25 EU/mL的TAL進行靈敏度復(fù)核，結(jié)果見表1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果

計算得：λc=lg^-1(∑X/4)=0.25，λc在0.5λ～2λ之間，故該批號鱟試劑可用于細菌內(nèi)毒素檢查，且以標(biāo)示靈敏度λ=0.25為該批號鱟試劑的靈敏度。

2.2  呋喃西林沖洗劑細菌內(nèi)毒素限值(L)的確定  《中華人民共和國藥典》2005年版(二部)附錄IS中規(guī)定，沖洗劑的L值應(yīng)小于0.5 EU/mL^[2]。

2.3  呋喃西林沖洗劑最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的確定  市售鱟試劑規(guī)格為0.03~0.50 EU/mL，按照公式MVD=C L/λ計算，L為0.5 EU/mL。C=1.0ml/ml，λ為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度，計算得MVD_0.06=8.33，MVD_0.125=4，MVD_0.25=2，MVD_0.5=1。

2.4  干擾預(yù)試驗  稱取處方量的呋喃西林、氯化鈉及苯甲酸鈉，選用市售除熱原的滅菌注射用水為溶媒，在層流超凈工作臺下制備呋喃西林溶液。制備最終稀釋倍數(shù)為1、2、4、8的溶液，將此系列溶液作為干擾預(yù)試驗的供試品溶液(NPC)，同時在上述系列溶液中加入含有2λ濃度的細菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為供試品陽性液(PPC)。取靈敏度(λ)為0.25 EU·mL^-1的鱟試劑與上述PPC和NPC進行反應(yīng)。每個濃度平行做2支，同時作陽性(PC)和陰性對照(NC)，鱟試劑對不同濃度的樣品的測試比較，見表2。

表2 干擾預(yù)試驗結(jié)果

表2的預(yù)試驗結(jié)果表明，呋喃西林原液及各稀釋后溶液對鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)均無干擾作用。

2.5  干擾試驗  為了進一步確認是否存在干擾，進行干擾試驗。制備呋喃西林沖洗劑，制備方法同干擾預(yù)實驗，將此溶液用內(nèi)毒素檢查用水稀釋2倍作為干擾試驗的供試品，選取靈敏度(λ)為0.25 EU/mL的鱟試劑。以該樣品為溶媒，將細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品分別配制成濃度為2λ、1λ、0.5λ和0.25λ的溶液。同時分別以細菌內(nèi)毒素檢查用水和稀釋2倍的供試品溶液作陰性對照。按下式計算反應(yīng)終點濃度的幾何平均值(Es和Et)。Es=lg^-1(∑Xs/4)；Et=lg^-1(∑Xt/4)，其中，Xs和Xt分別為BET水和供試品溶液為溶媒組的各反應(yīng)終點濃度的對數(shù)值。結(jié)果見表3。

表3 干擾試驗結(jié)果

結(jié)果表明，三批測得的Et/Es均在0.5～2之間，可證明呋喃西林沖洗劑在稀釋2倍的濃度下對內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)無干擾作用，可用鱟試劑法進行細菌內(nèi)毒素的檢測。

2.6  細菌內(nèi)毒素檢查方法驗證  取我院生產(chǎn)的呋喃西林溶液三批，用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋2倍，將稀釋后的溶液依照《中華人民共和國藥典》2005版“細菌內(nèi)毒素凝膠法”檢查。結(jié)果見表4。

表4 細菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

三批結(jié)果均符合藥典的規(guī)定。

3  討論

干擾試驗用呋喃西林沖洗劑的配制過程中，必須排除溶媒可能引入的細菌內(nèi)毒素，故選用除熱源的滅菌注射用水為溶媒配制，試驗前需將玻璃儀器于250℃下干熱滅菌1小時去除內(nèi)毒素。本試驗并未對處方中其他藥物單獨進行干擾試驗考察，故干擾試驗結(jié)果為呋喃西林沖洗劑處方中呋喃西林、氯化鈉及苯甲酸鈉對鱟試劑檢測方法的干擾結(jié)果。

4  結(jié)論

呋喃西林沖洗劑在稀釋2倍的濃度下對內(nèi)毒素與鱟試劑的反應(yīng)無干擾作用，可用靈敏度為0.25 EU·mL^-1的鱟試劑對其進行細菌內(nèi)毒素的檢測，對其進行質(zhì)量控制。

參考文獻：